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姚栩 (姚栩.) [1] | 陈智伟 (陈智伟.) [2] | 刘树韬 (刘树韬.) [3] | 黄晓霞 (黄晓霞.) [4]

Indexed by:

CQVIP PKU

Abstract:

目的 构建麻疹病毒血凝素蛋白基因的重组质粒,使其在大肠埃希菌中表达HA蛋白,为麻疹病毒诊断奠定基础.方法 从麻疹病毒株MV07-30中提取核糖核酸,用RT-PCR扩增HA基因,用限制性内切酶BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切HA基因片段和pGEM-Teasy载体,连接后获得重组质粒pGEM-Teasy-MVHA并克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+);用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术进行重组蛋白表达的分析;通过Ni-NTA亲和层析获得高纯度目的蛋白.结果 RT-PCR获得的HA基因片段约长1700 bp.转化的大肠杆菌表达产物在SDS-PAGE中出现与目的蛋白分子量相一致的条带,且重组蛋白主要以包涵体形式存在;血凝及血凝抑制实验显示表达产物具有良好的抗原性.结论 构建麻疹病毒HA基因的原核表达体系,纯化的重组蛋白可用作麻疹病毒检测的抗原.

Keyword:

原核表达 基因克隆 血凝素 麻疹病毒

Community:

  • [ 1 ] [姚栩]福州疾病预防控制中心
  • [ 2 ] [陈智伟]福州疾病预防控制中心
  • [ 3 ] [刘树韬]福州大学
  • [ 4 ] [黄晓霞]福州疾病预防控制中心

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Source :

中国卫生检验杂志

ISSN: 1004-8685

CN: 41-1192/R

Year: 2013

Issue: 11

Volume: 23

Page: 2481-2483,2486

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