Indexed by：
Abstract：
原核表达、纯化T4多聚核苷酸激酶,并尝试将纯化的T4 PNK用于短探针序列的连接.本研究以合成的pseT基因为模板,PCR扩增出带有NdeⅠ和BamH Ⅰ位点的目的片段,构建pseT-pET-15b原核表达载体,并转入E.coli ER2566中诱导表达.Ni-Agarose亲和层析柱纯化重组蛋白后,再进行Western blot鉴定.用纯化后再浓缩的T4PNK参与探针连接反应,并设置商品T4 PNK和阴性对照.PCR扩增成功获得大于900bp的目的基因片段,原核表达载体pseT-pET-15b构建成功,经诱导表达的重组蛋白分子量大小约为35kD,Western blotting确认蛋白表达正确,浓缩后的蛋白浓度达到826 μg/mL.电泳结果显示,重组T4 PNK在探针连接中效果较好.本研究成功表达并纯化了可溶性的T4多聚核苷酸激酶,且具有较好的活性,该蛋白可进一步用于后续大批量探针连接反应或其他相关研究,具有一定实际应用价值.
Keyword：
Reprint 's Address：
Email：
Version：
Source ：
基因组学与应用生物学
ISSN： 1674-568X
CN： 45-1369/Q
Year： 2019
Issue： 1
Volume： 38
Page： 63-68
Cited Count：
WoS CC Cited Count： 0
SCOPUS Cited Count：
ESI Highly Cited Papers on the List： 0 Unfold All
WanFang Cited Count： -1
Chinese Cited Count：
30 Days PV： 0
Affiliated Colleges：
