目的:构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的嵌合抗原受体(chimeric　antigen　receptor,CAR)及靶向上皮细胞黏附分子(epithelial　cell　adhesion　molecule,EPC　AM)嵌合抗原共刺激受体(chimeric　antigen　costimulatory　receptor,CCR)共修饰的T细胞,并对其进行体外活性评估.方法:将EPCAM-CCR和GPC3-CAR基因片段克隆入慢病毒载体质粒,酶切、PCR和测序鉴定CCR+CAR　pCDH重组载体.分离、激活和扩增人T细胞,利用慢病毒感染并筛选能够稳定表达该组合型嵌合抗原受体人T细胞.通过Western　blot、流式细胞术(flow　cytometry,FCM)验证CCR+CART细胞中CCR+CAR的表达,ELISA检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4的分泌.结果:成功构建CCR+CARpCDH慢病毒重组载体.成功分离、激活并扩增人T细胞.CCR+CAR　pCDH慢病毒成功感染人T细胞,RT-PCR、Western　blot检测也显示其成功表达目的蛋白,同时FCM分析显示CCR+CAR　T细胞表面CCR+CAR的表达率为42％左右;ELISA检测CCR+CAR与表达GPC3和EPCAM的HepG2、Huh-7共培,其分泌更高水平的IL-2、INF-γ、IL-4,同时与人正常肝细胞L-02共培未发现CCR+CAR　T细胞的有效激活.结论:成功获得组合型CCR+CAR　T细胞,并初步探究其在肝癌细胞中的免疫效应,为后续动物体内免疫及实体瘤过继免疫治疗中防脱靶效应奠定基础.