建立了一种同时测定5种β-阻断剂(卡替洛尔、艾司洛尔、普萘洛尔、索他洛尔、比索洛尔)的气相色谱-质谱方法(GC-MS),并用于疑似阳性实际尿样的初筛、定量和确证.分别对游离态和结合态药物进行了提取,合并提取液后采用N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺(C6H12F3NOSi,　MSTFA)和N-甲基-双三氟乙酰胺试剂(C5H3F6NO2,　MBTFA)进行混合衍生.确定了优化的GC-MS条件,建立了采用选择离子监测方式(SIM)初筛和全扫描方式(SCAN)确证的实验流程;建立了SIM模式下5种β-阻断剂的尿样加标工作曲线,其SIM方法的检出限达0.2～1.0　ng/mL,尿样的加标回收率为70.5%　～103.4%　,相对标准偏差小于14.9%　.该方法成功地用于普萘洛尔阳性尿样的检测,并绘制了普萘洛尔的尿代谢曲线.该方法对兴奋剂检测中β-阻断剂滥用的控制有重要的意义.