脂肪酶是一类酯键水解酶.微生物脂肪酶在应用酶类有巨大的价值,广泛用于食品、医药、洗涤剂、皮革和造纸等工业领域.本研究从Serratia　marcescens　BOB中克隆得到两条脂肪酶基因,并对其进行异源表达分析.
　　　　从北极冻土样品中筛选获得高效降解橄榄油的菌株BOB,由形态学和16S　rRNA方法,初步鉴定为粘质沙雷氏菌Serratia　marcescens,将菌株BOB命名为Serratia　marcescens　BOB.野生菌发酵液通过超滤和硫酸铵沉淀方法进行浓缩，酶学性质研究表明:野生菌BOB脂肪酶在最适作用温度30℃和最适作用pH7.0时，降解对硝基苯棕搁酸酯C16的酶活力为25.93U/mL;
　　　　Serratia　marcescens　BOB存在两条脂肪酶相关编码基因，通过PCR方法克隆得到其中一条酯酶/脂肪酶基因lip6，全长801bp,编码266个氨基酸和1个终止密码子。构建重组菌E.Coli　BL21-pET　28a(+)-lip6并优化重组菌的诱导条件:在菌体OD600约为0.5时，添加终浓度0.5mmol/L的IPTG,30℃诱导20h后，菌体经过超声波破碎获得大量可溶性蛋白LIPA，催化底物p-NPP的酶活力为520U/L。经过亲和层析柱纯化，SDS-PAGE检测在30kD处得到单一条带，比酶活为22.29U/mg;PCR克隆得到另一条脂肪酶基因1ip18，全长1842bP，编码614个氨基酸。构建重组菌E.Coli　BL21-pET-28a(+)-1ip18，重组酶LIPC的酶活力为5.29　U/mL。通过诱导条件优化，LIPC酶活提高1.7倍。经过亲和层析方法纯化后，SDS-PAGE在65　kD处检测到单一条带。酶学性质研究表明:重组酶LIPC是低温中性脂肪酶，最适作用pH和温度分别为7.0和30℃,热稳定性差，具有低温高催化活性(Km值为0.634　mmol/L,Vm值为1.131　mmol/L/min);对有机溶剂(甲醇、乙醇、丙醇、丙三醇等)有较好的耐受性，尤其对50％(v:v)丙三醇溶液的耐受性高达到130%;同时，重组酶高效水解中、长链脂肪酸((C10-C16);
　　　　构建pPIC9k-lip18重组表达载体，导入毕赤酵母P.pastoris　GS115中，重组酶LIPE降解p-NPP的活力为19.75U/mL，经过诱导条件优化和硫酸铵沉淀，重组酶酶活提高3.89倍。酶学性质研究表明:重组酶LIPE的最适作用pH和温度分别为7.5和35℃，在pH6.0-9.0和温度低于40℃时，LIPE蛋白稳定性较好;LIPE蛋白的有机溶剂耐受性以及底物特异性和LIPC蛋白较为相似。