Simple,　rapid,　convenient,　and　economical　surface　enhanced　Raman　scattering　(SERS)　substrate　is　developed　for　on-site　evaluation　of　Aflatoxin　B1　(AFB1)　in　food　matrix　using　handheld　Raman　Spectrometer.　Self-assembly　of　gold　nanobipyramids　(Au　NBPs)　into　the　nanoholes　of　anodic　aluminum　oxide　(AAO)　template/pattern　using　‘drop-dry’　approach　provides　a　reliable　pathway　for　the　rapid　fabrication　of　highly　active　and　uniform　SERS　substrate.　It　shows　enhanced　and　reproducible　SERS　signals　towards　the　probe　molecule,　4-aminothiophenol　(4-ATP)　with　a　relative　standard　deviation　(RSD)　of　less　than　10%　and　an　average　enhancement　factor　(EF)　of　1　×　108.　For　practical　application,　the　proposed　method　is　demonstrated　for　the　detection　of　aflatoxin　B1　(AFB1)　in　peanut　extracts.　The　results　show　that　the　AFB1　in　peanut　extracts　can　be　identified　within　1　min,　with　a　limit　of　detection　of　0.5　μg/L.　Compared　with　conventional　ELISA　based　AFB1　analysis,　our　method　is　much　more　efficient　(1　min　versus　＞30　min).　©　2019　Elsevier　Ltd