Simple,　rapid,　convenient,　and　economical　surface　enhanced　Raman　scattering　(SERS)　substrate　is　developed　for　on-site　evaluation　of　Aflatoxin　B-1　(AFB(1))　in　food　matrix　using　handheld　Raman　Spectrometer.　Self-assembly　of　gold　nanobipyramids　(Au　NBPs)　into　the　nanoholes　of　anodic　aluminum　oxide　(AAO)　template/pattern　using　＇drop-dry＇　approach　provides　a　reliable　pathway　for　the　rapid　fabrication　of　highly　active　and　uniform　SERS　substrate.　It　shows　enhanced　and　reproducible　SERS　signals　towards　the　probe　molecule,　4-aminothiophenol　(4-ATP)　with　a　relative　standard　deviation　(RSD)　of　less　than　10%　and　an　average　enhancement　factor　(EF)　of　1　x　10(8).　For　practical　application,　the　proposed　method　is　demonstrated　for　the　detection　of　aflatoxin　B-1　(AFB(1))　in　peanut　extracts.　The　results　show　that　the　AFB(1)　in　peanut　extracts　can　be　identified　within　1　min,　with　a　limit　of　detection　of　0.5　mu　g/L.　Compared　with　conventional　ELISA　based　AFB(1)　analysis,　our　method　is　much　more　efficient　(1　min　versus　＞　30　min).