融合了跨膜肽的抗氧化酶可进入细胞,保护细胞免受放射损伤.然而跨膜肽的跨膜能力没有靶向性,其也可把抗氧化酶带入肿瘤细胞进而保护肿瘤细胞,降低放疗的效果.为此,根据多数肿瘤细胞微环境中存在活性基质金属蛋白酶(matrix　metalloproteinase,MMP)-2或MMP-9的特点,在细胞跨膜肽R9与人铜、锌超氧化物歧化酶(superoxide　dismutase　1,SOD1)和谷胱甘肽S-转移酶(glutathione　S-transferase,GST)之间融合　MMP-2/9的底物肽X,设计了融合蛋白GST-SOD1-X-R9.该蛋白在肿瘤微环境中可因MMP-2/9酶切底物肽X而失去跨膜肽,从而无法进入肿瘤细胞,进而只能进入正常细胞.全基因合成SOD1-X-R9序列,并将其插入原核表达载体pGEX-4T-1中,得到表达质粒,并实现了GST-SOD1-X-R9融合蛋白的可溶表达.GST-SOD1-X-R9经硫酸铵沉淀和GST亲和层析纯化,分子量约为47kDa,与理论值一致.纯化的融合蛋白的SOD活性和GST活性分别为2　954　U/mg和328　U/mgoGST-SOD1-X-R9的SOD活性或GST活性在生理条件下几乎没有变化.该融合蛋白在溶液中可被胶原酶Ⅳ部分水解.分别建立了2D和3D培养的HepG2细胞模型来检验肿瘤微环境中的MMP-2活力对该蛋白跨膜能力的影响.在2D培养模型中,HepG2的MMP-2活力极低,但在3D培养模型中,随着培养时间的增加,HepG2肿瘤球的体积变大,其胞外MMP-2活力也随之增强.GST-SOD1-X-R9在2D培养的HepG2细胞中具有和GST-SOD1-R9蛋白一样的跨膜效率,但在3D培养的HepG2细胞球中的跨膜能力大大降低.本研究为后续深入研究GST-SOD1-X-R9靶向防护正常细胞的氧化损伤效应奠定了基础.