以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprH-M的上、下游序列,作为同源交换臂,并以温敏复制型质粒pKcll39为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49中安普霉素生物合成的重组质粒pHMl06。质粒经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,并筛选得到发生同源双交换工程菌,命名为黑暗链霉菌HMl06。通过PCR鉴定,证明工程菌HMl06中的aprH-M被tet^r替换。对工程菌HMl06进行发酵产物分析,结果是其发酵效价下降明显,仅为出发菌株的40%左右。采用薄层层析(TLC)对其组分分析,其安普霉素组分消失,因此,初步判断已成功阻断安普霉素的生物合成。