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蔡海松 (蔡海松.) [1] | 林晓栩 (林晓栩.) [2] | 郭永华 (郭永华.) [3] | 陈龙军 (陈龙军.) [4] | 张慧 (张慧.) [5] | 邱宏端 (邱宏端.) [6] | 林新坚 (林新坚.) [7] | 陈济琛 (陈济琛.) [8]

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Abstract:

【目的】研究不同的信号肽和化学通透剂对重组环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)胞外分泌的影响,提高CGTase的胞外分泌量。【方法】扩增地芽孢杆菌CHB1(Geobacillus sp.CHB1)的CGTase基因,构建带有地芽孢杆菌CHB1自身信号肽、Omp A、Pel B信号肽和不带信号肽的4种重组质粒;比较4种重组质粒对重组CGTase胞外分泌的影响,筛选最优的信号肽;考察甘氨酸、Triton X-100、SDS和Tween 80四种化学通透剂对重组CGTase胞外分泌的影响,确定最佳的化学通透剂及其浓度。【结果】Omp A信号肽介导的分泌效果最好,胞外酶活达到7.44 U/m L,分别是Pel B、CHB1信号肽的2.04倍和11.27倍,不带信号肽的重组质粒菌胞外检测不到酶活;携带Omp A信号肽的重组质粒菌发酵48 h,同时添加浓度为0.6%的甘氨酸和0.3%的Triton X-100,胞外酶活达最大到14.27 U/m L;SDS和Tween 80对该酶的胞外分泌具有明显的抑制作用。【结论】Omp A信号肽的介导效果最佳,同时添加浓度为0.6%和0.3%的甘氨酸和Triton X-100可以有效促进胞外分泌,为该重组酶的高效胞外分泌提供了一种有效的方法。

Keyword:

信号肽 化学通透剂 环糊精葡萄糖基转移酶 胞外分泌

Community:

  • [ 1 ] 福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州350003
  • [ 2 ] 福州大学生物科学与工程学院,福建福州350108

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Source :

微生物学通报

ISSN: 0253-2654

Year: 2017

Issue: 3

Volume: 44

Page: 601-610

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