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[目的]研究不同的信号肽和化学通透剂对重组环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)胞外分泌的影响,提高CGTase的胞外分泌量.[方法]扩增地芽孢杆菌CHB1 (Geobacillus sp.CHB1)的CGTase基因,构建带有地芽孢杆菌CHB1自身信号肽、OmpA、PelB信号肽和不带信号肽的4种重组质粒;比较4种重组质粒对重组CGTase胞外分泌的影响,筛选最优的信号肽;考察甘氨酸、Triton X-100、SDS和Tween 80四种化学通透剂对重组CGTase胞外分泌的影响,确定最佳的化学通透剂及其浓度.[结果]OmpA信号肽介导的分泌效果最好,胞外酶活达到7.44 U/mL,分别是PelB、CHB1信号肽的2.04倍和11.27倍,不带信号肽的重组质粒菌胞外检测不到酶活;携带OmpA信号肽的重组质粒菌发酵48 h,同时添加浓度为0.6%的甘氨酸和0.3%的Triton X-100,胞外酶活达最大到14.27 U/mL;SDS和Tween 80对该酶的胞外分泌具有明显的抑制作用.[结论]OmpA信号肽的介导效果最佳,同时添加浓度为0.6%和0.3%的甘氨酸和Triton X-1 00可以有效促进胞外分泌,为该重组酶的高效胞外分泌提供了一种有效的方法.
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微生物学通报
ISSN: 0253-2654
CN: 11-1996/Q
Year: 2017
Issue: 3
Volume: 44
Page: 601-610
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