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刘震 (刘震.) [1] | 陈倩 (陈倩.) [2] | 陈荫楠 (陈荫楠.) [3] | 王祖鑫 (王祖鑫.) [4] | 朱秋享 (朱秋享.) [5] | 石贤爱 (石贤爱.) [6]

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PKU CSCD

Abstract:

【目的】从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出bgl C基因并在大肠杆菌中表达,分析表达产物的酶学性质并进行结构模拟,为进一步研究其生理功能及结构解析奠定基础。【方法】将bgl C基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,通过定向进化获取水解效率提高的突变株,经Ni-NTA镍离子层析柱纯化后,测定野生枯草芽孢杆菌β-糖苷酶与突变酶的性质。利用CD光谱,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及三维结构建模,分析野生酶与突变酶的高级结构。【结果】野生酶的比活力为9.7 U/mg,最适催化温度为60℃,最适p H值是7.0。经过突变和筛选,我们得到一个突变体BS-GLY_M1(A...

Keyword:

CD光谱 寡聚体 底物特异性 异源表达 易错PCR 结构建模

Community:

  • [ 1 ] 福州大学生物科学与工程学院
  • [ 2 ] 福州大学药物生物技术与工程研究所
  • [ 3 ] 福建省医疗器械和医药技术重点实验室

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Source :

微生物学报

Year: 2015

Issue: 10

Volume: 55

Page: 1273-1283

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30 Days PV: 4

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