背景　视网膜微血管周细胞(RMPs)在糖尿病视网膜病变(DR)等视网膜新生血管性疾病中的作用日益受到重视,并被视为潜在的治疗靶点.然而因组织材料来源受限及细胞分离纯化不易,RMPs体外研究工作的开展受到了限制.　目的　建立简便的大鼠RMPs分离、培养和纯化方法.方法　摘取清洁级健康雄性SD大鼠的眼球,置于体积分数75％乙醇中浸泡1　min,用眼科显微手术器械分离获取视网膜并将其剪成碎片,依次用2.5　g/L胰蛋白酶和2　g/L　Ⅰ型胶原酶各消化15　min,消化后分别过直径100　μm和55　μm滤网,收集视网膜消化后的微血管片段,用含有体积分数20％胎牛血清的低糖型DMEM接种于6孔板,至培养14　～　16　d细胞达到80％～90％融合时进行消化传代,培养和传代期间通过换液法及差异消化法去除杂质细胞.用倒置相差显微镜观察细胞的形态和生长状态,用免疫荧光法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β)、von　Willebrand因子(vWF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定RMPs.　结果　RMPs在接种后24　～　48　h自微血管片段中迁移出,7d后形成中等大的细胞集落,14～　16　d后达到80％　～　90％融合状态.RMPs传代后生长速度加快,至12～14　d达到融合.形态学鉴定显示,培养的细胞呈宽大、扁平、不规则形并伴多个突起的典型周细胞形态特征,且传代至第9代形态特征无明显变化.免疫荧光法检测显示,所培养的细胞均不表达内皮细胞特异性标志物vWF,约96％的细胞对周细胞标志物α-SMA或PDGFR-β抗体呈阳性反应,极少量细胞对胶质细胞特异性标志物GFAP抗体呈阳性表达.　结论　本实验成功建立了一种简单、经济的大鼠RMPs分离、纯化、培养方法,可以获得理想的高纯度RMPs.