目的　建立简便的小鼠原代视网膜微血管周细胞(RMPs)分离、纯化、培养方法.方法　在体视显微镜下机械分离获取小鼠视网膜,并碎化、胶原酶消化、过滤处理,收集视网膜碎片,预孵24　h后用接种于含有体积分数20％胎牛血清的低糖型DMEM　6孔板进行培养,并采用差异消化法纯化原代RMPs.通过倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫荧光法鉴定周细胞标志物,周细胞/内皮细胞共培养系统鉴定周细胞的功能.结果　经预孵的视网膜碎片再次孵育24　h后,细胞开始从视网膜碎片中迁移出,逐渐增生形成大小不一的细胞集落.原代或子代细胞胞体呈不规则三角形,多个长突触,无接触性抑制.免疫荧光显示第3代细胞绝大部分α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)表达阳性,极少部分胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,von　Willebrand因子(vWF)表达阴性,RMPs纯度达97％以上.体外培养的小鼠RMPs能被血管内皮细胞所募集,共同形成微血管样条索.结论　本实验成功建立了一种简便的小鼠原代RMPs分离、纯化、培养方法,所培养的小鼠原代RMPs为功能性RMPs.