Abstract:
艾滋病是由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus , HIV) 攻击人体 免疫系统引起的一种免疫功能缺失症,极易传染蔓延,严重威胁人类健康。目前 对HIV 早期诊断主要是基于聚合酶链式反应(PCR)和连接酶链反应(LCR)的 DNA 信号扩增技术。它们灵敏度虽高,但由于仪器昂贵、操作繁琐,从而限制 了其在临床实际检测中的应用。相比之下,基因芯片技术以其高通量、快速检测 等优点,在基因表达、基因分型、肿瘤诊断等领域得以广泛应用。但当前多使用 荧光法进行检测和分析,灵敏度不高,还无法满足临床实际检测的需要。本文将 巯基标记的HIV 相关DNA 探针通过金硫键固定在芯片上,与靶序列杂交后,形成双螺旋结构。由于该双螺旋结构含有kas 蛋白的特异性识别序列,从而将生物 素标记的kas 蛋白修饰到芯片上。而后,通过生物素-亲和素的特异性结合作用, 进一步将亲和素标记的辣根过氧化物酶(HRP)修饰到芯片上。最后,将在芯片 上加入含有底物3, 3'', 5, 5''-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢的测定溶液,在 HRP的催化作用下,H2O2 催化氧化TMB 生成双偶氮联苯胺类物质,从而产生 电化学信号,应用计时电流法实现对HIV 目标序列的高灵敏检测。
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Year: 2011
Page: 745-746
Language: Chinese
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