A　sensitive　pressurized　capillary　electrochromatography-laser　induced　fluorescence　detection　(pCEC-LIF)　method　has　been　developed　for　the　simultaneous　analysis　of　five　structurally　related　free　bile　acids　including　cholic　acid　(CA)　and　lithocholic　acid　(LCA),　as　well　as　the　stereoisomers　of　chenodeoxycholic　acid　(CDCA),　deoxycholic　acid　(DCA)　and　ursodeoxycholic　acid　(UDCA).　4-nitro-7-N-piperazino-2,1,3-benzoxadiazole　(NBD-PZ)　was　used　for　the　precolumn　derivatization　of　non-chromogenic　free　bile　acids　to　form　strongly　fluorescent　adducts.　Efficient　separation　of　these　derivatization　products　was　performed　within　17　min　by　isocratic　elution　pCEC　on　an　octadecyl　silica　(ODS)　packed　capillary　column,　using　a　mobile　phase　consisting　of　acetonitrile　and　10　mM　CAPS　buffer　(pH　8.0)　(60:40　v/v),　20　kV　of　applied　voltage　and　10.8　MPa　of　supplementary　pressure.　The　derivatized　bile　acids　could　be　determined　by　a　LIF　detector　at　an　excitation　wavelength　of　473　nm　and　an　emission　wavelength　of　530　nm,　with　detection　limits　(signal/noise　=　3)　down　to　2　nmol　L-1.　Applicability　of　this　pCEC-LIF　method　to　the　analysis　of　human　serum　samples　was　demonstrated.　Accepted　recoveries　ranging　between　94.8%　and　109.7%　for　all　analytes　in　spiked　human　serum　samples　were　achieved.　This　method　has　potential　for　the　trace　analysis　of　physiologically　important　acidic　analogs.　©　2010　The　Royal　Society　of　Chemistry.