菌菇来源可溶性β-葡聚糖具有良好的生物活性，为开发利用蛹虫草中的β-葡聚糖，本研究以蛹虫草子实体为原料，采用蛋白酶酶解、大孔树脂吸附、DEAE离子交换柱层析进行纯化，以脱色率及β-葡聚糖保留率进行加权评分，摸索建立最佳纯化工艺条件。对获得的β-葡聚糖进行结构分析，并研究其体外降血糖活性。结果显示：大孔树脂HPD-750具有最佳的吸附效果，其吸附最优条件为：上样流速5　mL/min、上样浓度4　mg/mL、上样体积400　mL、树脂质量40　g。利用DEAE-FF纤维素交换柱分离出两个β-葡聚糖组分CMBG-1和CMBG-2，相对分子量分别为13.57×104　Da和14.36×104　Da；均由Gal，Glc，Ara三种单糖组成，其摩尔比分别为1.28:5.27:1.01和0.71:4.43:0.80。通过刚果红分析得出CMBG-1具有三螺旋结构，而CMBG-2不具备三螺旋结构，二者对α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶抑制率都与样品的浓度呈正相关，其对α-淀粉酶抑制的IC50分别为2.68和4.32　mg/mL，对α-葡萄糖苷酶抑制的IC50分别为2.37和3.01　mg/mL，拥有三螺旋结构的CMBG-1的降血糖活性明显高于不具备三螺旋结构的CMBG-2，在功能食品开发方面具有良好的前景。