为解决桔霉素分子印迹聚合物在构建和应用过程中模板分子泄露和功能单体筛选工作量大的问题，以1-羟基-2-萘甲酸为假模板分子，基于液相色谱法构建桔霉素和1-羟基-2-萘甲酸的同时检测方法，该方法对分子印迹洗脱液中的两种目标物具有良好的回收率（≥95%），也能对功能红曲醇提液中桔霉素进行分离。运用量子化学方法，通过分子构型优化、原子电荷分布计算和结合能计算优选了构建分子印迹聚合物的功能单体2,6-二氨基吡啶。以响应面对其制备工艺进行优化，优化后的聚合物对桔霉素的吸附载量为（195.10±13.21）ng/g，相比优化前提高了0.79倍。以甲基丙烯酸为功能单体构建的桔霉素分子印迹聚合物为对照，对比了优化后的聚合物和对照聚合物的吸附性能，前者对桔霉素的吸附载量为后者的3倍，证实计算机模拟技术在桔霉素分子印迹聚合物构建中的实用性，旨在为分子印迹聚合物的构建和桔霉素富集与检测提供参考。