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天然异胡椒醇作为一种植物来源香料,具有很高的经济价值.目前国内外还未见利用大肠杆菌工程菌株转化生产异胡椒醇的报道.[目的]构建工程菌,采用生物合成方法获得天然香料异胡椒醇.[方法]对来自胡椒薄荷的细胞色素P450家族的柠檬烯-3-羟化酶(LIM3H)基因PM2进行改造,截短LIM3H的N端疏水区,分别添加17a短肽或2B1短肽增加其亲水性,采用CO差示光谱法检测LIM3H活性;将N端疏水区截短后的来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的NADPH-细胞色素P450还原酶基因(trATR)和修饰后LIM3H基因(Modi-LIM3H)融合后表达,最终以柠檬烯为底物进行全细胞转化.[结果]3种N端修饰LIM3H基因均检测到LIM3H表达和异胡椒醇生成,其中17a短肽修饰后的蛋白表达量最高,异胡椒醇产量达到1.94 mg/L.[结论]本研究在大肠杆菌中增加外源LIM3H与ATR,成功催化柠檬烯生成异胡椒醇,为天然异胡椒醇的生产提供了新的方法.
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微生物学报
ISSN： 0001-6209
Year： 2023
Issue： 3
Volume： 63
Page： 1243-1253
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