基于柱前衍生-高效液相色谱/紫外检测技术，建立了多糖水解单糖的HPLC分析技术，用于凉粉草提取液多糖水解单糖组分分析和含量测定。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生，优化并获得了单糖组分的衍生条件和HPLC梯度洗脱分析流程，鉴别了核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等8种单糖；应用于18种凉粉草提取液样品分析，凉粉草多糖水解单糖以半乳糖醛酸、葡萄糖和半乳糖为主，含量分别为2.50～20.48μg/mL、2.97～38.52μg/mL、2.72～89.32μg/mL。该方法操作简单、准确，可为凉粉草多糖提取液水解单糖组分特征评价与定量分析提供技术。