A　rapid　method　is　described　for　the　preparation　of　a　highly　uniform　and　sensitive　SERS　substrate　by　an　improved　‘drop-and-dry’　method.　Gold　nanobipyramids　(Au　NBPs)　were　prepared　inside　the　nanoholes　(nanowalls)　of　anodic　aluminum　oxide　(AAO)　templates　with　a　typically　5-μm　nanohole　depth.　The　SERS　substrate　can　be　prepared　by　this　method　within　40 s　and　on　large　scale.　The　SERS　signals　obtained　with　this　Au　NBPs-AAO　substrate　is　stronger　by　four-orders　of　magnitude　compared　to　conventional　a　silicon　wafer　substrate.　The　SERS　signal　for　dopamine　(DA;　measured　at　1311 cm　−1　)　is　found　to　be　enhanced　by　a　factor　of　2.2　×　10　8　.　The　response　to　DA　extends　from　10 nM　to　0.1 mM,　and　the　limit　of　detection　is　6.5 nM　(at　S/N =　3).　The　assay　was　applied　to　the　determination　of　DA　in　spiked　human　serum.　[Figure　not　available:　see　fulltext.].　©　2019,　Springer-Verlag　GmbH　Austria,　part　of　Springer　Nature.