Carbon　dots　(CDs)　emerge　as　excellent　fluorescent　nanomaterials,　but　the　full　exploitation　and　application　of　their　exceptional　properties　in　the　development　of　fluorescence　assay　are　still　rare.　In　this　work,　cationic　carbon　dots　(C-CDs)　covered　with　plenty　of　positive　charges　on　the　surface　were　synthesized　through　a　facile　ultrasonic　method.　Negatively　charged　hyaluronic　acid　(HA)　caused　the　aggregation　of　positively　charged　C-CDs　and　neutral　red　(NR)　along　its　linear　chain　via　electrostatic　adsorption,　leading　to　a　remarkable　Förster　resonance　energy　transfer　(FRET)　from　C-CDs　to　NR.　However,　the　presence　of　hyaluronidase　(HAase)　resulted　in　the　enzymolysis　of　HA,　as　well　as　the　liberation　of　C-CDs　and　NR.　The　corresponding　change　of　fluorescence　color　from　red　to　green-yellow　afforded　a　reliable　ratiometric　assay　for　HAase.　Also　the　ratio　of　fluorescence　intensity　for　C-CDs　(I525)　to　that　for　NR　(I630)　was　used　for　quantitative　detection　of　HAase.　The　proposed　sensing　system　was　easily　operated　in　aqueous　media　with　a　detection　limit　of　0.05　U/mL.　This　strategy　provides　a　new　approach　for　the　wider　application　of　some　special　CDs　in　detecting　biomolecules.　©　2017　American　Chemical　Society.